04.49
MPN (Most
Probable Number) atau JPT (Jumlah Perkiraan Terdekat) suatu metode yang digunakan untuk mengetahui jumlah perkiraan dari bakteri golongan Coliform.
Metode MPN biasa juga disebut dengan metode tabung ganda, karena menggunakan
tabung dengan jumlah/formasi tertentu yang berisi kaldu laktosa dan tabung
durham untuk memperlihatkan fermentasi terhadap laktosa serta pembentukan gas.
Pelaksanaan analisa dilakukan berdasarkan metode standar dari APHA (American
Public Health Association), yaitu untuk mengetahui jumlah bakteri Coliform digunakan tabel Hopkins, yang lebih dikenal dengan tabel MPN atau tabel JPT.
Tabel tersebut dapat digunakan untuk memperkirakan jumlah bakteri Coliform
dalam 100 ml air (Suriawiria, 1996).
Pemeriksaan
MPN Coliform terdiri dari tiga tahap, yaitu (Depkes RI, 1991):
Ø Tes perkiraan
(presumptive test)
Suatu seri
media laktosa broth (LB) ditambah dengan volume air yang bebeda
jumlahnya dalam seri desimal atau pengenceran 10X.misalnya:
5 tabung
pertama masing-masing ditambah dengan 10 ml air
5 tabung
kedua masing-masing ditambah dengan 1 ml air
5 tabung
ketiga masing-masing ditambah dengan 0,1 ml air
dieramkan pada
suhu 37oC selama 2 X 24 jam. Bakteri golongan Coliform akan
memfermentasikan media laktosa dengan petunjuk kekeruhan dan pembentukan gas
dalam tabung durham (tabung kecil) yang dipasang terbalik didalam media
laktosa.
Ø
2. Tes penegasan (Confermed test)
Disini dipakai
media BGLB (Brilliant Green Laktosa Broth) yang jumlahnya sesuai dengan
jumlah tabung media laktosa broth (LB) yang menunjukkan reaksi positif.
Dari masing-masing tabung media laktosa yang postif diambil satu ose , kemudian
diinokulasikan dalam masing-masing media BGLB yang disediakan sesuai dengan
deretannya, misalnya: dari LB 5.5.5 yang positif ada 5.4.1, kemudian
diinokulasikan pada BGLB dan dieramkan pada suhu 37oC selama 2 X 24
jam. Tabung BGLB yang positif yaitu yang menunjukkan adanya kekeruhan dan gas
pada tabung durham, dicatat dan dicocokkan dengan tabel MPN. Misalnya:
Dari 5
tabung yang positif tes perkiraan, 4 positif tes penegasan
Dari 4
tabung yang positif tes perkiraan, 2 positif tes penegasan
Dari 1
tabung yang positif tes perkiraan, 0 positif tes penegasan
Maka angka
4.2.0 yang dicatat dan dicocokkan pada tabel MPN untuk mendapatkan nilai
MPN-nya.Pada tabel dengan 15 tabung, 4.2.0 memberikan nilai MPN 22 /100 ml air.
Ø
3. Tes lengkap (Completed test)
Disini
digunakan media agar EMB (Eosin Methylen Blue) atau Endo agar.Semua
tabung yang menunjukkan hasil positif pada BGLB diinokulasikan pada EMB Agar,
dieramkan pada suhu 37oC selama 2 X 24 jam. Koloni khas pada EMB
Agar yaitu warna hijau metalik dilanjutkan kepada tes IMViC untuk membuktikan
apakah spesies Escherichi coli atau bukan.Pada pemeriksaan kualitas air
digunakan berbagai macam ragam tabung yang berisi kaldu laktosa, tergantung
dari tingkat kerapatan bakteri yang ada pada air tersebut. Untuk air yang sudah
diolah digunakan ragam 5.1.1, untuk air yang belum diolah digunakan 5.5.5,
untuk air badan air dan air limbah juga digunakan 5.5.5 tetapi sebelumnya
contoh air diencerkan terlebih dahulu untuk mendapatkan hasil yang lebih akurat
(Depkes, 1993).
Tabel 2.1 Tabel MPN atau Tabel Hopkins
(Depkes RI, 1993).
Volume
|
Nilai
MPN/100 ml
|
Volume
|
Nilai
MPN/100 ml
|
|||||
10 ml
|
1 ml
|
0,1 ml
|
10 ml
|
1 ml
|
0,1 ml
|
|||
0
0
0
0
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
4
4
4
4
4
4
|
0
0
1
2
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
3
0
0
1
1
2
2
0
0
1
1
1
2
|
0
1
0
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
0
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
2
0
|
<2
2
2
4
2
4
4
6
6
5
7
7
9
9
12
8
11
11
14
14
17
13
17
17
21
26
22
|
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
|
2
3
3
4
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3
3
3
3
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
|
1
0
1
0
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
2
3
0
1
2
3
4
0
1
2
3
4
5
|
26
27
33
34
23
31
43
33
46
63
49
70
94
79
110
140
180
130
170
220
280
350
240
350
540
920
1600
>2400
|
|
0 Comments
