KOMPOSISI MEDIA TES BIOKIMIA DAN MEDIA GULA - GULA

20.20

kumpulan prosedur kerja pembuatan media tes biokimia dan media gula - gula

1. Media Sulfur Indol Mutility ( SIM )

Ø Komposis

· Tryptone : 20 gram

· Peptone : 6,1 gram

· Ferrous ammonium sulphte : 0,2 gram

· Sodium thiosulphate : 0,2 gram

· Agar : 3,5 gram

Ø Persiapan alat dan bahan

a. Alat :

1. Autoclave

2. Batang pengaduk

3. Erlenmeyer

4. Kertas pH

5. Neraca

6. Sendok tanduk

7. Tabung + rak

8. Pipet tetes

9. Pipet ukur

10. Waterbath

b. Bahan :

1. Aquadest

2. KOH

3. Powder SIM

Ø Cara kerja :

· Menyiapkan alat dan bahan

· Cara penimbangan :

Penimbangan reagent dilakukan sesuai dengan kebutuhan/volume yang akan dibuat dan berpedoman kepada cara pembuatan yang tertera pada botol reagen.

Pada botol reagent tertera 30 gr dalam 1000 ml, sementara yang akan dibuat 100 ml sehingga bahan yang akan ditimbang sebanyak :

x gram : 30 x 100/1000 = 3 gram

jadi bahan yang ditimbang adalah sebanyak 3 gram lalu dilarutkan ke dalam aquadest sebanyak 100 ml.

· Mengatur pH aquadest

Untuk menghindari kesalahan pembuatan media khususnya SIM, salah satunya harus memperhatikan pH aquadest yang digunakan. pH aquadest yang diatur pHnya sesuai dengan volume yang akan kita gunakan. pH aquadest untuk media SIM yaitu 7,3 ± 0,2, jika pH masih dibawah ketentuan atau cenderung ke asam ( < 5 ), maka harus ditambahkan dengan KOH tetes demi tetes hingga mencapai pH yang diinginkan. Demikian pula bila pH diatas ketentuan media cenderung basa ( > 7 ), maka harus ditambahkan HCL tetes demi tetes hingga mencapai pH yang diinginkan.

· Melarutkan bahan

Bahan yang telah ditimbang dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml, sisa bahan yang menempel pada cawan yang digunakan menimbang dibilas dengan aquadest sebanyak tiga kali, kemudian tambahkan aquadest dengan pH yang telah diatur sebelumnya sampai pada garis tanda 100 ml, lalu diaduk.

Karena tidak semua langsung larut maka untuk melarutkannya digunakan waterbath. Waktu pelarutan tidak ditentukan, namun sesekali harus dicek hingga tidak ada lagi butiran zat pada dinding tabung atau larutan.

· Menuang ke dalam tabung

Setelah larut sempurna, larutan dituang ke dalam tabung yang telah disiapkan lebih dahulu. Tiap – tiap tabung di isi dengan larutan sebanyak 2 ml, lalu ditutup dengan kapas untuk menghindari terjadinya kontaminasi.

· Mensterilkan media

Tabung – tabung yang telah terisi dengan larutan dimasukkan kedalam keranjang autoclave dan selanjutnya disterilkan ke dalam autoclave selama 15 menit setelah mencapai 121°C.

· Menyiapkan media

· Setelah proses sterilisasi selesai, media diinginkan sampai membeku lalu disimpan di lemari es.

2. Media TSIA

Ø Komposisi

· Lab – lemco Powder : 3,0 gram

· Peptone : 20,0 gram

· Lactose : 10,0 gram

· Glokusa : 10, gram

· Sodium thiosulphate : 0,3 gram

· Agar : 12,0 gram

· Yeast extrac : 3,0 gram

· Sodium chloride : 5,0 gram

· Sukrosa : 10,0 gram

· Ferri citraco : 0,3 gram

· Phenol red : 0,5 gram

Ø Persiapan alat dan bahan

a. Alat :

1. Autoclave

2. Batang pengaduk

3. Erlenmeyer

4. Kertas pH

5. Neraca

6. Sendok tanduk

7. Tabung + rak

8. Pipet tetes

9. Pipet ukur

10. Waterbath

b. Bahan :

1. Aquadest

2. Kapas

3. KOH

4. Powder TSIA

Ø Cara kerja

· Menyiapkan alat dan bahan

· Menimbang bahan :

Penimbangan reagent dilakukan sesuai dengan kebutuhan/volume yang akan dibuat dan berpedoman kepada cra pembuatan yang tertera pada botol reagen. Pada botol tertera 65 gram dalam 1 liter, sementara yang akan dibuat 50 ml, sehingga bahan yang ditimbang sebanyak :

X gram : gram x 50 / 1000 = 3,25 gram

· Mengatur pH aquadest

Untuk menghindari kesalahan pembuatan khususnya media TSIA, salah satunya harus mempertahankan pH aquadest yang digunakan. pH aquadest yang diatur pHnya sesuai dengan volume yang akan kita gunakan. pH aquadest untuk media TSIA yaitu 7,4 ± 0,2 jika pH masih dibawah ketentuan atau cenderung ke asam ( < 5 ) maka harus ditambahkan dengan KOH tetes demi tetes, hingga mencapai pH yang diinginkan. Demikian pula bila pH di atas ketentuan media cenderung ke basa ( > 7 ), maka harus ditambahkan HCL tetes demi tetes hingga mencapai pH yang diinginkan.

· Melarutkan bahan

Bahan yang telah ditimbang dimasukkan kedalam Erlenmeyer, sisa bahan yang menempel pada cawan yang digunakan menimbang dibilas dengan aquadest sebanyak 3 kali, kemudian tambahkan aquadest sebanyak 50 ml. karena tidak semua langsung larut maka untuk melarutkannya digunakan waterbath. Waktu pelarutan tidak ditentunkan, namun sesekali harus dicek hingga tidak lagi butiran zat pada dinding tabung atau larutan.

· Menuang larutan kedalam tabung

Setelah larut sempurna larutan dituang ke dalam tabung yang telah disiapkan lebih dahulu. Kemudian larutan dipipet kedalam tabung sebanyak 2,5 ml larutan.

· Mensterilkan media

Tabung – tabung yang telah terisi dengan larutan ditutup dengan kapas kemudian disterilkan ke dalam autoclave selama 15 menit setelah mencapai suhu 121°C.

· Menyiapkan media

Setelah proses sterilisasi selesai media didinginkan dengan posisi miring setelah padat atau membeku lalu disimpan di lemari es.

3. Media MR/VP ( Metil Red/Vouges Proskauer )

Ø Komposisi

· Peptone from alent : 7,0 gram

· D ( + ) glucose : 5,0 gram

· Phosphate buffer : 5,0 gram

Ø Persiapan alat dan bahan

a. Alat :

1. Autoclave

2. Batang pengaduk

3. Erlenmeyer

4. Kertas pH

5. Neraca

6. Sendok tanduk

7. Tabung + rak

8. Pipet tetes

9. Pipet ukur

10. Waterbath

b. Bahan :

1. Aquadest

2. Powder media

3. KOH

Ø Cara kerja

· Menyiapkan alat dan bahan

· Cara penimbangan :

Penimbangan reagent dilakukan sesuai dengan kebutuhan/volume yang akan dibuat dan berpedoman kepada cara pembuatan yang tertera pada botol reagent. Pada botol reagent tertera 17 gram dalam 1000 ml, sementara yang akan dibuat 200 ml sehingga bahan yang akan ditimbang sebanyak :

x gram 17 x 200/1000 = 3,4 gram.

Jadi bahan yang ditimbang adalah sebanyak 3,4 gram lalu dilarutkan kedalam aquadest sebanyak 200 ml.

· Mengatur pH aquadest

Untuk menghindari kesalahan pembuatan media khususnya MR/VP, salah satunya harus memperhatikan pH aquadest yang digunakan. pH aquadest yang diatur pHnya sesuai dengan volume yang akan kita gunakan. pH aquadest untuk media MR/VP yaitu 6,9 ± 0,2, jika pH masih dibawah ketentuan atau cenderung ke asam ( < 5 ), maka hurus ditambahkan dengan KOH tetes demi tetes hingga mencapai pH yang diinginkan. Demikian pula bila pH diatas ketentuan media cenderung basa ( >7 ), maka harus ditambahkan HCL tetes demi tetes hingga mencapai pH yang diinginkan.

· Melarutkan media

Bahan yang telah ditimbang dimasukkan kedalam Erlenmeyer 250 ml, sisa bahan yang menempel pada cawan yang digunakan menimbang dibilas dengan aquadest sebanyak tiga kali, kemudian tambahkan aquadest dengan pH yang telah diatur sebelumnya sampai pada garis tanda 200 ml lalu diaduk.

· Menuang kedalam tabung

Setelah larut sempurna, larutan dituang ke dalam tabung yang telah disiapkan lebih dahulu. Kemudian larutan dipipet ke dalam tabung sebanyak 2 ml larutan.

· Mensterilkan media

Tabung – tabung yang telah terisi dengan larutan ditutup dengan kapas kemudian dimasukkan ke dalam keranjang autoclave dan selanjutnya disterilkan ke dalam autoclave selama 15 menit setelah mencapai 121°C.

· Menyimpan media

Setelah proses sterilisasi selesai, media didinginkan dengan posisi miring setelah padat atau membeku lalu disimpan di lemari es.

4. Media urea

Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan enzim urease yang menguraikan urea menjadi ammonium dan CO2. Aktivitas enzim urease ini dapat diamati dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam media biakan yang mengandung urea dan indicator pH (biasanya phenol red). Bila urea dihidrolisiskan, NH₂⁺ terakumulasi dalam media biakan dan menyebabkan pH media menjadi basa. Perubahan warna dari erah-jingga menjadi merah ungumerupakan petunjuk terjadinya hidrolisis urea. Bahan yang diperlukan :

Biakan : Treponema

Basilus

Media biakan Agar urea (agar miring)

· Cara mengerjakan :

Hari pertama :

Ø Tandai tabung dengan nama, tanggal, dan mikroorganisme yang diuji.

Ø Inokulasi agar miring dengan mikroorganisme.

Ø Inkubasi pada suhu 35°C selama 48 jam.

Hari kedua :

Ø Amati perubahan warna dari merah jingga menjadi merah – ungu. Bila perubahan warna sulit diamati karena pertumbuhan yang subur pada permukaan agar miring, bandingkan bagian “ slant” dengan bagian “ butt”.

Ø Laporkan hasil pengujian.

5. Media gula – gula

Ø Komposisi

· Bacteriological peptone : 5,0 gram

· NaCl : 2,5 gram

· Aquadest : 500 ml

· Gula – gula ( glukosa, sukrosa, maltose, laktosa )

· BTB : 0,4 %

Ø Persiapan alat dan bahan

a. Alat :

1. Autoclave

2. Batang pengaduk

3. Cawan petri

4. Durham

5. Erlenmeyer

6. Kertas pH

7. Neraca

8. Sendok tanduk

9. Tabung + rak

10. Pipet tetes

11. Pipet ukur

12. Waterbath

b. Bahan :

1. Aquadest

2. BTB

3. Larutan KOH

4. Larutan K2Cr2O4

5. Larutan fuchsin

6. Methylen blue

7. NaCl

8. Powder bacteriological

9. Powder laktosa

10. Powder glukosa

11. Powder maltose

12. Powder sukrosa

13. Peptone

Ø Cara kerja

· Menyiapkan alat dan bahan

· Membuat air peptone

Air peptone dibuat dengan melarutkan 5 gram Bacteriological peptone dan 2,5 gram NaCl dalam 500 ml, agar larut sempurna pelarutan dilakukan diwaterbath.

· Membuat larutan BTB 0,4 %

0,2 gram BTB dilarutkan dalam 50 ml diatas waterbath.

· Melarutkan Gula – gula ( glukosa, laktosa, maltose, sukrosa )

Air peptone yang telah dibuat dibagi kedalam empat Erlenmeyer, masing – masing 125 ml, air peptone inilah yang dipakai melarutkan 2,5 gram gula - gula. Satu Erlenmeyer diisi satu jenis gula – gula.

· Penambahan indicator

Larutan BTB 0,4 % yang dipakai sebagai indicator pada larutan campuran dengan larutan KOH sehingga berwarna biru. Campuran inilah yang ditambahkan ke larutan gula – gula sampai warna larutan menjadi hijau tua.

· Menuang kedalam tabung

Sebelum menuang, tabung – tabung harus lebih dahulu disiapakan dan telah diisi tabung durham. Tiap tabung diisi larutan 2,5 ml – 3 ml. sebelum tabung – tabung ditutup dengan kapas, durhamnya dipastikan telah terisi oleh larutan gula - gula tidak ada lagi udara didalam durham.

· Mensterilkan media gula – gula

Proses sterilisasi dilakukan di dalam autoclave selama 15 menit setelah mencapai suhu 121°C.

· Menyimpan media

Media yagn telah steril didinginkan dan selanjutnya disimpan di dalam lemari es sampai siap digunakan.